• 产品参数
规格:
  • 96T
  • 48T
  价格: ¥2300
英文简称: Rat Short-chain Fatty acids(SCFA) ELISA Kit
产品编号: JPS-40007
货期: 1-2个工作日
检测方法: 双抗体夹心
上样体积: 10UL
特异性: 不与其它可溶性结构类似物交叉反应
包装类型: 盒装液体
储存条件: 2-8度
用途: 仅用于科研
有效期: 6个月
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产品详情

检测原理

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被短链脂肪酸(SCFA)抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的短链脂肪酸(SCFA)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。

样品收集、处理及保存方法

1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。

2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。

3. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。

6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但避免反复冻融.

7. 不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)含量

自备物品

1. 酶标仪(450nm)

2. 高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒温箱

 

 

操作注意事项

1. 试剂盒保存在2-8℃,使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶完全溶解后再使用。

2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。

3. 浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白;按照说明书操作时样本已经稀释5倍,最终结果乘以5才是样本实际浓度

4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

5.  所有液体组分使用前充分摇匀。

试剂盒组成

名称96孔配置48孔配置备注
微孔酶标板12孔×8条12孔×4条
标准品0.3mL*6管0.3mL*6管
样本稀释液6mL3mL
检测抗体-HRP10mL5mL
20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释
底物A6mL3mL
底物B6mL3mL
终止液6mL3mL
封板膜2张2张
说明书1份1份
自封袋1个1个

注:标准品(S0-S5)浓度依次为:0、5、10、20、40、80μg/ml

试剂的准备

 20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。

洗板方法

1.  手工洗板:甩尽孔内液体,每孔加满洗涤液,静置1min后甩尽孔内液体,在吸水纸上拍干,如此洗板5次。

2.  自动洗板机:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。

操作步骤

1.  从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.  设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;

3.  样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL;空白孔不加。 

4.  除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.  弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。

6.  每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值

结果判断

 绘制标准曲线:在Excel工作表中,以标准品浓度作横坐标,对应OD值作纵坐标,绘制出标准品线性回归曲线,按曲线方程计算各样本浓度值

 

试剂盒性能

1. 准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数R值,大于等于0.9900。

2. 灵敏度:最低检测浓度小于1.0μg/ml

3. 检测范围:1.0μg/ml-80μg/ml

4. 特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

5. 重复性:板内、板间变异系数均小于15%。

6. 贮藏:2-8℃,避光防潮保存。

 有效期:6个月


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